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如何選擇和使用 XBridge C18 色譜柱?

更新時(shí)間:2025-03-21   點(diǎn)擊次數(shù):78次
   XBridge C18 色譜柱是 Waters 公司推出的一款高性能反相色譜柱,廣泛應(yīng)用于液相色譜(HPLC)和超高效液相色譜(UHPLC)分析中。它采用了第二代無(wú)機(jī)/有機(jī)雜化顆粒技術(shù)(BEH 技術(shù)),具有優(yōu)異的化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械強(qiáng)度。

XBridge C18 色譜柱

 

  一、為什么選擇 XBridge C18 色譜柱?
  1、寬 pH 范圍
  XBridge C18 色譜柱能夠在 pH 1-12 的范圍內(nèi)保持優(yōu)異的化學(xué)穩(wěn)定性。這意味著無(wú)論你分析的是酸性、中性還是堿性化合物,色譜柱都能穩(wěn)定工作。例如,在高 pH 條件下,其穩(wěn)定性比傳統(tǒng)硅膠基質(zhì)色譜柱高出 10 倍以上。
  2、低柱滲漏
  該色譜柱具有極低的柱滲漏,特別適合高靈敏度的 LC-MS 聯(lián)用分析。低滲漏可以減少雜質(zhì)離子對(duì)檢測(cè)信號(hào)的干擾,提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。
  3、優(yōu)異的峰形
  XBridge C18 色譜柱通過(guò)專有的三鍵鍵合和封端技術(shù),顯著改善了堿性化合物的色譜峰形。這意味著在分析堿性藥物成分或生物分子時(shí),你將獲得更對(duì)稱、無(wú)拖尾或前伸的色譜峰,從而提高定量分析的準(zhǔn)確性。
  4、高柱效
  采用 BEH 顆粒技術(shù),XBridge C18 色譜柱能夠提供高柱效。高柱效意味著更窄的色譜峰和更高的分辨率,特別適合快速分析和復(fù)雜樣品的分離。
  5、長(zhǎng)使用壽命
  即使在苛刻的使用條件下,XBridge C18 色譜柱也能保持穩(wěn)定的性能和較長(zhǎng)的使用壽命。這意味著你可以減少更換色譜柱的頻率,降低實(shí)驗(yàn)成本。
 
  二、如何選擇合適的 XBridge C18 色譜柱?
  1、粒徑選擇
  XBridge C18 色譜柱提供多種粒徑選擇,包括 2.5µm、3.5µm和5µm:
  (1)2.5µm:適用于超高效液相色譜(UHPLC),能夠提供更高的柱效和更快的分析速度,但需要更高的壓力。
  (2)3.5µm:適用于常規(guī) HPLC 和 UHPLC,平衡了柱效和壓力,適合大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室。
  (3)5µm:適用于常規(guī) HPLC,壓力較低,適合老舊設(shè)備或?qū)χб蟛桓叩膽?yīng)用。
  2、柱尺寸選擇
  色譜柱的內(nèi)徑和長(zhǎng)度也會(huì)影響分離效果:
  (1)內(nèi)徑:常見(jiàn)的內(nèi)徑有2.1mm、3 mm和4.6mm。較小的內(nèi)徑(如 2.1mm)適合微量分析和梯度洗脫,能夠減少溶劑消耗;較大的內(nèi)徑(如 4.6 mm)適合常規(guī)分析和高通量檢測(cè)。
  (2)長(zhǎng)度:常見(jiàn)的長(zhǎng)度有50mm、75mm、100mm、150mm和 250mm。較短的色譜柱(如50mm)適合快速分析,但分辨率較低;較長(zhǎng)的色譜柱(如 250 mm)能夠提供更高的分辨率,但分析時(shí)間較長(zhǎng)。
  3、應(yīng)用需求
  根據(jù)你的具體應(yīng)用需求選擇合適的色譜柱:
  (1)生物醫(yī)學(xué)研究:如果分析蛋白質(zhì)、肽或寡核苷酸,建議選擇 小粒徑(2.5µm或3.5µm)和較長(zhǎng)的色譜柱(150 mm 或 250 mm),以獲得高分辨率和高靈敏度。
  (2)藥物研發(fā):對(duì)于藥物成分的分離和純化,可以選擇 3.5µm或 5µm的色譜柱,內(nèi)徑根據(jù)樣品量和分析通量選擇。
  (3)環(huán)境分析:如果檢測(cè)環(huán)境樣品中的復(fù)雜成分,建議選擇高柱效的 2.5µm或3.5µm色譜柱,以實(shí)現(xiàn)更好的分離效果。
  (4)食品檢測(cè):對(duì)于檢測(cè)食品中的添加劑或污染物,可以選擇常規(guī)的 5µm色譜柱,內(nèi)徑根據(jù)樣品通量選擇。
 
  三、XBridge C18 色譜柱的使用與維護(hù)
  1、使用前準(zhǔn)備
  (1)平衡色譜柱:在使用前,使用適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)相平衡色譜柱,通常需要 10-20 個(gè)柱體積 的流動(dòng)相。例如,對(duì)于一個(gè)150mm×4.6 mm的色譜柱,大約需要10mL的流動(dòng)相。
  (2)檢查系統(tǒng):確保液相色譜系統(tǒng)沒(méi)有泄漏,泵和檢測(cè)器的性能良好。
  2、使用注意事項(xiàng)
  (1)避免惡劣條件:雖然 XBridge C18色譜柱具有寬 pH 范圍,但在特殊pH 條件下(如 pH < 1 或 pH > 12),仍需謹(jǐn)慎使用。
  (2)控制流速:根據(jù)色譜柱的規(guī)格選擇合適的流速。例如,對(duì)于 4.6mm × 150mm 的色譜柱,建議流速為 1.0 mL/min。
  (3)避免過(guò)壓:不要超過(guò)色譜柱的最大耐壓值。例如,對(duì)于5µm的色譜柱,最大耐壓為 400 bar。
  3、維護(hù)與清潔
  (1)定期沖洗:每次使用后,用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ缂状蓟蛞译妫_洗色譜柱,以去除殘留的樣品和雜質(zhì)。
  (2)避免反向沖洗:XBridge C18 色譜柱通常不建議反向沖洗,因?yàn)檫@可能會(huì)損壞篩板。
  (3)存儲(chǔ)條件:將色譜柱存儲(chǔ)在 20% 甲醇水溶液 中,避免干燥。
 
  四、常見(jiàn)問(wèn)題解答
  1、可以用于梯度洗脫嗎?
  可以。XBridge C18適用于梯度洗脫,能夠提供良好的分離效果。在梯度洗脫過(guò)程中,建議使用小內(nèi)徑(如2.1mm)的色譜柱,以減少溶劑消耗。
  2、使用壽命一般是多久?
  XBridge C18 色譜柱的使用壽命因使用條件和維護(hù)情況而異。在良好的維護(hù)下,色譜柱可以使用 數(shù)千次進(jìn)樣。如果發(fā)現(xiàn)色譜峰變寬、拖尾或柱壓異常升高,可能需要更換色譜柱。
  3、可以用于 LC-MS 聯(lián)用分析嗎?
  可以。XBridge C18具有極低的柱滲漏,特別適合高靈敏度的 LC-MS 聯(lián)用分析。
 
  XBridge C18 色譜柱憑借其優(yōu)異的性能和廣泛的適用性,成為色譜分析領(lǐng)域中的可靠選擇。通過(guò)合理選擇粒徑和柱尺寸,以及正確使用和維護(hù)色譜柱,你將獲得更穩(wěn)定、高效的分析結(jié)果。

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